UNIVERSIT─T T▄BINGEN   Institut fⁿr Pflanzenbiochemie

72076 Tⁿbingen   Corrensstra▀e 41  Tel. (07071) 29-72956  e-mail: helga.ninnemann@uni-tuebingen.de(helga.ninnemann@uni-tuebingen.de)

Pflanzenbiochemisches Grosspraktikum

tΣglich ganztΣgig - fⁿr Diplom-Biologen, Lehramtsbiologen und Biochemiker

Voraussetzungen : Interesse an biochemischen Fragestellungen, Analytik; mind. Hauptstudium 
mit Laborerfahrung

Anmeldung pers÷nlich oder telefonisch vormittags, Tel. 29-72956, bei Frau Beil. 

Betreuer:

Prof. Dr. Helga Ninnemann, Dr. Lieselotte Schilde, Dr. Josef Maier, Dr. Immanuel Heck

Inhalt

Das Praktikum umfasst 8 einw÷chige plus einen 3-w÷chigen Projektversuch aus folgenden Gebieten :

Phytoalexine aus infiziertem Pflanzengewebe; verschiedene Extraktionsmethoden, Trennung, Identifzierung und Quantifizierung mittels GC/MS und GC/FID; Nachweis biologischer AktivitΣt der Phytoalexine im Biotest. Induktion der Synthese durch ArachidonsΣure in Kartoffelscheiben.

Mitochondrien: Isolierung und Reinigung aus Pflanzen, Kopplung von Elektronentransport und oxidativer Phosphorylierung, Einsatz von Hemmstoffen zur Bestimmung der Topologie der Atmungskette; Eigenheiten pflanzlicher Atmungsketten; ATP-Synthese-Wege, ADP-, Mg ²⁺ -abhΣngige Kinetiken (Spektralphotometrie).

Analyse der Mitochondrien-DNA somatischer Hybride der Kartoffel : Isolierung, DNA-Extraktion, Restriktionsverdau, Hybridisierung mit Mitochondrien-spezifischen Sonden.

Chloroplasten: Isolierung, Versuche zur Lichtreaktion der Photosynthese, Beeinflussung des Elektronentransports durch verschiedene Inhibitoren, Differenzierung von Photosystem I und II, Wirkung von Herbiziden auf die Photosynthese

Pterine in Pilzen, Pflanzen und Cyanobakterien: Isolierung/Identifizierung von Pterinen (RP-HPLC, UV/VIS- und Fluoreszensspektrometrie, Ionenaustauschchromatographie, Bestimmung des Reduktionsgrades, GC-MS.

Biosynthese von Pterinen in Pilzen und Cyanobakterien: EnzymprΣparation und Proteinreinigung von Biosyntheseenzymen, Enzymtests, Auswertung mit HPLC, Bestimmung von kinetischen Eigenschaften, Inhibitor-Analysen, Bestimmung von Zwischenprodukten, Induktion der Biosynthese von Pteringlykosiden in Cyanobakterien durch UV-Strahlung

Blaulicht-Signaltransduktion in Pilzen: BlaulichtabhΣngige Konidienbildung bei Neurospora und Sporangiophorenbildung bei Phycomyces , Beeinflussung durch Effektoren und Inhibitoren der Signaltransduktion. Untersuchung der Rolle von NO-Synthasen bei der Signaltransduktion.

Nitratassimilation von Pflanzen und Pilzen: Messung der Nitratreduktion, Tagesgang der Nitratreduktase, Isolierung von Nitratreduktase aus Pilzen, Untersuchung von Nitratreduktase-negativen Mutanten, Rekonstitution mit Molybdopterin

RT-PCR von Enzymen der Pterinbiosynthese in Pilzen und Pflanzen: DNA-Sequenzen und Proteinstrukturen aus dem Internet, DNA-Software, Design und Synthese von Consensus-Primern, Isolierung von mRNA, Synthese von cDNA, PCR, Analyse amplifizierter DNA-Fragmente, Klonierung von PCR-Produkten, Sequenzierung der Produkte.

Zellfusion von pathogenresistenten und Zuchtlinien der Kartoffel: PrΣparation von Protoplasten, Fusion von Zellen, Isolierung von DNA, RFLP und RAPD-Analyse der Fusionsprodukte (Molekularbiologische Charakterisierung mit Restriktion, Membarntransfer, nichtradioaktive Hybridisierung, PCR)

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